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yb体育正式官网:Biozellen3D类器官培养基质胶套装 B-P-0000

2022-08-06 10:33:35 |来源:yb体育平台 作者:YOBET体育官网

  9、3D培养结束后基质胶可以温和融化,并保留3D细胞/类器官结构完整性;

  Biozellen®3D类器官培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液,可应用到3D细胞培养与微环境应用等;本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试;植物胶体可快速形成水凝胶, 请操作前详细阅读此使用指南。

  C缓冲溶液(1X)制备:使用前将10X C缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如: 无血清DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .

  3.取 20-40 微升步骤 2 含细胞的混合 A 胶溶液滴于 步骤 1 预冷的培养板上,胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶,可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。

  4.待胶体成胶后,添加1毫升冰的1X C缓冲溶液,并盖过步骤3 的胶溶液,固定 15 分钟。

  5.待15分钟固定后,小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

  6将含有细胞的胶于37°C 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养,并观察细胞球体的形成,按正常培养基更换频率进行更换操作。

  小心的将 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的D缓冲溶液,盖过胶滴于室温反应 5分钟。

  将含有细胞球体的溶液吸入1.5 毫升离心管,用1000 rpm的转速离心10分钟,移除上清液体并收集细胞球体做分析。

  3. 待细胞球体完全分解,加入3倍体积的1X PBS,并用1000转的转速进行离心10分钟,并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。

  2、用37 ℃已回温的C缓冲溶液 (0.5 X)将A胶 (1X) 原液体积稀释5-20倍,建议一开始可选用15倍。 (根据细胞种类做稀释比例对比实验,找出最适合自己实验体系的稀释倍数,稀释倍数越高,胶体越软,越容易穿透)

  12、将Transwell移至载玻片上,在显微镜下随机6-9个视野观察计算迁移的细胞数。

  1、取细胞溶液离心后收集细胞沉淀,与C缓冲溶液 (0.5 X) 均匀混合使细胞浓度为3*106 cells/mL。

  2、A胶 (1X) 与步骤 1 含 C缓冲溶液 (0.5 X) 的细胞系悬浮液,按照 2:1 比例均匀混合配置,细胞悬浮液最终浓度为 106 cells/mL。使用前置于37℃,可降低黏度。 (C缓冲溶液用于A胶凝胶反应,例如0.5ml C 缓冲溶液(0.5 X)含细胞 加入 1ml A胶 (1X) 混合成1.5ml 的注射液)

  3、选用 23-26 G 的针头 (建议选用 24 G) 及 1 mL 针筒,抽取 步骤2 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液至所需注射体积 (例如:0.2-0.6 mL) 。室温37℃至20℃操作抽取。 (若抽取时发生塞针状态,可先把针头拔掉,以针筒进行抽取,建议一次抽取配置好所需针筒数量,避免步骤2 溶液过度凝胶,发生塞针)

  4、将抽取好步骤 3 的针筒,带入动物房, 若短时间无法施打建议置于冰上。

  1.含 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液的针筒、2.皮肤消毒剂 (例如 : 酒精)、

  1、室温下可直接注射。若是置于冰盒上的针筒,回到室温后,待液化再进行注射。 含 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液的针筒,以皮下注射方式,注射实验所需的体积至实验鼠 (建议皮下注射量为 0.2 mL,实际状况依需求而定)。(针筒放冰上注射阻力会上升, 放室溫会液化注射阻力小。注射时若因凝胶缘故而阻力变大,需缓慢注射避免针头喷落)

  注1 :注射体积可依不同实验目的做调整,若为皮下血管生成研究注射体积需至少0.5 mL以上。

  注2 :此步骤依实验需求可执行或不执行,若需呈现明显的皮下注射隆起效果,可调整2.试剂制备将C缓冲溶液 (10 X) 稀释15倍,变成C缓冲溶液 (0.66 X),再执行后续成胶实验;提高C浓度,可提高胶体硬度。

  注3 :若为血管生成研究,应注射含VEGF及heparin的A胶,以促进血管生成。约三天后,可摘取含有新血管生成的肿瘤组织。